Study on the relationship between lncRNA SNHG5 and miR-132-3p expression in placenta tissue of preeclampsia patients
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摘要:目的观察长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因5(lncRNA SNHG5)和miR-132-3p在子痫前期(PE)病人胎盘组织中的表达，分析二者的相关性及对PE的诊断价值。方法选取112例PE病人作为研究对象，根据PE严重程度分为重度组58例和轻度组54例，另外选取同期健康妊娠孕妇60例作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测胎盘组织中lncRNA SNHG5和miR-132-3p表达；Pearson相关分析观察PE病人胎盘组织中lncRNA SNHG5与miR-132-3p的相关性，及lncRNA SNHG5、miR-132-3p与临床指标的相关性；ROC曲线分析lncRNA SNHG5和miR-132-3p水平对PE的诊断价值。结果轻度组和重度组PE病人24 h尿蛋白、收缩压以及舒张压水平均高于对照组(P < 0.05)；重度组收缩压、舒张压均高于轻度组(P < 0.05)。轻度组、重度组lncRNA SNHG5水平低于对照组(P < 0.05)，miR-132-3p水平高于对照组(P < 0.05)；重度组lncRNA SNHG5水平低于轻度组(P < 0.05)。胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p表达与PE病人24 h尿蛋白、收缩压和舒张压均有相关关系(P < 0.05~P < 0.01)，与年龄、孕周和体质量指数无明显相关关系(P>0.05)。PE病人胎盘组组织中lncRNA SNHG5与miR-132-3p表达呈负相关关系(r=-0.509，P < 0.05)。ROC曲线分析结果显示，胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p诊断PE的曲线下面积分别为0.865、0.883，截断值分别为0.93、1.44，敏感度分别为87.9%、79.3%，特异性分别为71.7%、83.3%；二者联合诊断PE的曲线下面积为0.921，敏感度和特异性分别为89.7%、81.7%。结论PE病人胎盘组织中lncRNA SNHG5呈低表达，miR-132-3p呈高表达，且二者呈负相关关系，为PE的诊断和靶向治疗提供了新的思路。
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关键词:
- 子痫前期 /
- 长链非编码RNA /
- 小核仁RNA宿主基因5 /
- miR-132-3p /
- 胎盘
Abstract:ObjectiveTo observe the expression of long non-coding RNA small nucleolar RNA host gene 5 (lncRNA SNHG5) and miR-132-3p in placental tissue of preeclampsia (PE) patients, and to analyze the correlation between them, and their diagnostic value for PE.MethodsA total of 112 patients with PE were selected as the study subjects, and divided into severe group (n=58) and mild group (n=54) according to the severity of PE.Sixty healthy pregnant women in the same period were selected as the control group.Real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression of lncRNA SNHG5and miR-132-3p in placental tissue.Pearson correlation analysis was applied to observe the correlation between lncRNA SNHG5 and miR-132-3p in placental tissue of PE patients, and the correlation between lncRNA SNHG5, miR-132-3p and clinical indicators.ROC curve was employed to analyze the diagnostic value of lncRNA SNHG5 and miR-132-3p levels for PE.ResultsThe level of 24 h urinary protein, systolic blood pressure and diastolic blood pressure of PE patients in the mild group and severe group was higher than that in the control group (P < 0.05), and the level of systolic blood pressure and diastolic blood pressure in the severe group was higher than that in the mild group (P < 0.05).The level of lncRNA SNHG5 in the mild group and severe group was lower than that in the control group (P < 0.05), and the level of miR-132-3p was higher than that in the control group (P < 0.05);the level of lncRNA SNHG5 in the severe group was lower than that in the mild group (P < 0.05).The expression of lncRNA SNHG5 and miR-132-3p in placental tissue was correlated with 24 h urine protein, systolic blood pressure and diastolic blood pressure of PE patients (P < 0.05 to P < 0.01), but was not correlated with age, gestational week and body mass index (P>0.05).There was a negative correlation between lncRNA SNHG5 and miR-132-3p expression in placental tissue of PE patients (r=-0.509, P < 0.05).The results of ROC curve analysis showed that the area under the curve of lncRNA SNHG5 and miR-132-3p in placental tissue in the diagnosis of PE was 0.865 and 0.883, the cutoff value was 0.93 and 1.44, the sensitivity was 87.9% and 79.3%, and the specificity was 71.7% and 83.3%, respectively; the area under the curve of the combination of lncRNA SNHG5 and miR-132-3p in the diagnosis of PE was 0.921, the sensitivity and specificity were 89.7% and 81.7%, respectively.ConclusionsLncRNA SNHG5 is lowly expressed and miR-132-3p is highly expressed in the placenta tissue of PE patients, and they are negatively correlated, which provides new ideas for the diagnosis and targeted therapy of PE.-
Keywords:
- preeclampsia /
- long non-coding RNA /
- small nucleolar RNA host gene 5 /
- miR-132-3p /
- placenta
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子痫前期(pre-eclampsia，PE)是发生在妊娠20周后威胁孕妇健康的一种综合征，伴有高血压、尿蛋白、水肿等临床表现，以及明显的肝、肾或血液功能障碍，严重时可引起孕妇和胎儿死亡[1-2]。PE临床特征是不完全的滋养层细胞浸润和子宫胎盘灌注减少，引起胎盘缺血、缺氧以及内皮功能障碍[3]。目前对PE的病理生理机制仍然知之甚少，研究[4]表明滋养细胞对子宫动脉的侵袭不足，引起子宫胎盘灌注压降低和胎盘缺血、缺氧以及母体免疫反应的变化与PE的发生发展密切相关。由于PE的发病机制尚不明晰，因此研究发现PE的有效诊断标志物，对PE早期诊断具有非常重要的作用。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一类无蛋白质编码功能的RNA大分子，研究[5-6]发现，lncRNA的差异表达可影响PE的发生、发展过程。lncRNA小核仁RNA宿主基因5(small nucleolar RNA host gene 5，SNHG5)在PE病人的胎盘组织中低表达，可能通过影响miRNA-155/cyclin D1途径，引起滋养细胞的增殖能力下降。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类在转录后影响基因水平的非编码小分子RNA，研究[7]表明，miRNA可参与PE的发生、发展过程。已有研究[8]证实，与健康妊娠孕妇相比，PE病人miR-132-3p表达上调，推测其在PE发生中起着关键作用。本研究通过对PE病人胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p表达水平检测，并分析二者的相关性，以期为PE的早期临床诊断提供依据，为PE的靶向治疗提供参考。
1. 资料与方法
1.1 一般资料
选取2017-2019年于我院就诊的112例PE病人为研究对象，年龄20~43岁，根据国际诊断标准[9]将PE病人分为轻度PE 54例(轻度组)，重度PE 58例(重度组)。另外选取同期健康妊娠孕妇60例作为对照组，年龄20~43岁。同时收集受试者孕周、体质量指数(body mass index，BMI)、24 h尿蛋白、收缩压、舒张压等指标。纳入标准: (1)在本院定期产检，且有PE妊娠症状孕妇；(2)首胎、单胎妊娠；(3)剖宫产分娩；(4)同意配合，且个人、家属签署知情同意书。排除标准: (1)妊娠期合并症及其他合并症病史；(2)具有家族遗传病史者；(3)不遵医嘱者。
1.2 胎盘组织采集
子宫内找到胎盘附着位置并剥离，在胎盘母体面中央以十字线划分区域，每个区域分别选取4块1 cm×1 cm×1 cm组织块(避免钙化灶、机化灶等)，收集剖宫产分娩后5 min内的无菌胎盘组织，立即使用无菌0.9%氯化钠溶液冲洗干净并吸干表面水分，分装于已提前加入500 μL RNAlater的1.5 mL EP管中，置于-80 ℃冰箱备用。
1.3 实时荧光定量PCR检测胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p表达水平
采用TRIzol法提取胎盘组织中总RNA，按照试剂盒方法逆转录，得到cDNA。取逆转录产物，进行实时荧光定量PCR。利用实时荧光定量PCR检测试剂盒(Q222-01，Vazyme)检测lncRNA SNHG5、miR-132-3p表达，引物序列见表 1。反应体系: 上下游引物各1 mL，cDNA模板1 mL，2×SYBR Green mix 10 mL，用ddH2O补至20 mL。反应程序: 94 ℃、5 min，37个循环(92 ℃、30 s，55 ℃、30 s，72 ℃、45 s)，75 ℃、5 min。以2-△△CT法计算lncRNA SNHG5、miR-132-3p表达水平。
表 1 实时荧光定量PCR引物序列基因 正向引物5′-3′ 反向引物5′-3′ lncRNA SNHG5 TAG AGA TGC AAA GAT ACA CGA AA CAC ACT CAG AAC GCT GTT CAC GAPDH GGT GAA GGT CGG AGT CAA CG CAA AGT TGT CAT GGA TGH ACC miR-132-3p ACGC ACC ACT AAC AGT CTA CAG C TAT GCT TGT TCT CGT CTC TGT GTC U6 CTC GCT TCG GCA GCA CA AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT 1.4 统计学方法
采用方差分析、q检验、Pearson相关分析和ROC曲线分析。
2. 结果
2.1 3组一般资料比较
3组年龄、孕周和BMI差异均无统计学意义(P>0.05)；轻度组和重度组PE病人24 h尿蛋白、收缩压以及舒张压水平均高于对照组(P < 0.05)；重度组收缩压、舒张压均高于轻度组(P < 0.05)(见表 2)。
表 2 3组一般资料比较(x±s)分组 n 年龄/岁 孕周/周 BMI/(kg/m2) 24 h尿蛋白/g 收缩压/mmHg 舒张压/mmHg 对照组 60 34.68±4.96 36.32±4.21 27.49±5.76 0.21±0.05 119.92±34.68 78.94±10.21 轻度组 54 34.97±5.06 37.13±3.74 27.28±5.54 1.19±0.53* 148.36±33.19* 96.45±17.32* 重度组 58 35.29±6.24 36.75±3.92 27.67±5.47 1.35±0.69* 164.52±37.64*# 107.64±26.65*# F — 0.18 0.59 0.07 89.87 24.23 33.41 P — >0.05 >0.05 >0.05 < 0.01 < 0.01 < 0.01 MS组内 — 29.751 15.757 31.300 0.250 1 243.188 370.013 q检验: 与对照组比较*P < 0.05；与轻度组比较#P < 0.05 2.2 3组孕妇胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p表达水平比较
轻度组、重度组lncRNA SNHG5水平低于对照组(P < 0.05)，miR-132-3p水平高于对照组(P < 0.05)；重度组lncRNA SNHG5水平低于轻度组(P < 0.05)(见表 3)。
表 3 3组孕妇胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p相对表达水平比较(x±s)分组 n lncRNA SNHG5 miR-132-3p 对照组 60 1.04±0.37 1.10±0.39 轻度组 54 0.76±0.24* 1.61±0.47* 重度组 58 0.61±0.32*# 1.74±0.51* F — 28.03 32.11 P — < 0.01 < 0.01 MS组内 — 0.100 0.210 q检验: 与对照组比较*P < 0.05；与轻度组比较#P < 0.05 2.3 胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p表达与PE病人临床指标的相关关系
胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p表达与PE病人24 h尿蛋白、收缩压和舒张压均有相关关系(P < 0.05~ P < 0.01)，与年龄、孕周和BMI无明显相关关系(P>0.05)(见表 4)。
表 4 胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p表达与PE病人临床指标的相关关系(r)项目 年龄 孕周 BMI 24 h尿蛋白 收缩压 舒张压 lncRNA SNHG5 -0.043 -0.083 -0.023 -0.440** -0.584** -0.614** miR-132-3p 0.079 0.069 0.038 0.310* 0.642** 0.552** *P < 0.05, **P < 0.01 2.4 PE病人胎盘组组织中lncRNA SNHG5与miR-132-3p表达的相关性分析
PE病人胎盘组组织中lncRNA SNHG5与miR-132-3p表达呈负相关关系(r′=-0.509，P < 0.05)。
2.5 ROC曲线分析胎盘组织中lncRNA SNHG5与miR-132-3p表达对PE的诊断价值
ROC曲线分析结果显示，胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p诊断PE的曲线下面积分别为0.865(95%CI: 0.801~0.930)、0.883(95%CI: 0.825~0.941)，截断值分别为0.93、1.44，敏感度分别为87.9%、79.3%，特异性分别为71.7%、83.3%；二者联合诊断PE的曲线下面积为0.921(95%CI: 0.875~0.968)，敏感度和特异性分别为89.7%、81.7%。
3. 讨论
PE是妊娠期常见的并发症，发病率占全球的4%~5%，即使在某些发达国家，PE仍是引起孕产妇死亡的重要原因[10]。PE发生的原因主要有两方面: (1)胎源性, 主要是螺旋动脉重塑障碍或滋养细胞侵入不充分等原因；(2)母源性, 主要是炎症和代谢等因素[11]。随着二胎政策的放开，PE发病率也随之升高，严重威胁孕妇健康。因此，寻找PE发病相关的标志物，可为其诊断和治疗提供更有效的方案。
既往研究[12]表明，lncRNA可参与基因表达的不同阶段，如转录阶段、转录后阶段、翻译阶段等，可直接调控靶标基因的表达，影响疾病的发生、发展过程。已有研究[13]表明，lncRNA在PE病人胎盘组织中的表达具有差异化，提示其可参与PE的生理病理过程。已有实验[14]证明，PE病人胎盘组织中lncRNA SNHG5表达显著低于正常产妇，其可能通过调节miR-155/CXCR4通路，进而影响滋养细胞的侵袭能力，参与PE的发病过程。本研究发现，与对照组相比，轻度组、重度组PE病人胎盘组织中lncRNA SNHG5相对表达量降低，且重度组低于轻度组；此外，胎盘组织中lncRNA SNHG5水平与PE病人24 h尿蛋白、收缩压及舒张压具有一定的相关性，提示lncRNA SNHG5低表达可能通过调控相关信号通路，影响滋养细胞迁移、侵袭能力，进而参与PE的发生、发展过程。进一步ROC曲线分析显示，lncRNA SNHG5诊断PE的曲线下面积为0.865，截断值为0.93时，其敏感度和特异性分别为87.9%、71.7%，表明lncRNA SNHG5可能作为诊断PE发生的潜在标志物。
临床研究[15-16]证实，miRNA可以直接通过与靶基因mRNA特异性碱基互补配对，在转录后水平调控基因的表达，参与个体发育、细胞增殖、分化等多个新陈代谢过程。研究[6]表明，miRNA在PE病患胎盘组织中存在异常表达，可以作为PE病患的一种分子标志物。有研究[8]发现，与健康孕妇相比，PE病人血浆中miR-132-3p表达显著上调。目前有关miR-132-3p与PE的关系研究报道不多，因此有必要进一步探究其参与疾病的具体机制。本研究结果表明，与对照组相比，轻度组、重度组PE病人miR-132-3p相对表达量升高；miR-132-3p水平与PE病人24 h尿蛋白、收缩压及舒张压具有一定的相关性，表明miR-132-3p可能与PE的发生、发展密切相关；ROC曲线分析显示，miR-132-3p诊断PE的曲线下面积为0.833，截断值为1.44时，其敏感度和特异度分别为79.3%、83.3%，提示miR-132-3p可能作为预测PE发生的标志物。
人类基因组中仅有不到10%的基因组可被转录形成编码RNA，则大多数基因组为非编码RNA，其中lncRNA、miRNA是最重要的组成部分，二者在个体生命活动中具有不可缺少的作用，且lncRNA还可作为miRNA的前体参与机体发育，二者相辅相成，共同作用，形成了一个复杂的调控网络[17]。已有研究[18-19]证实，lncRNA SNHG5通过靶向调控miR-132的表达，进而影响慢性阻塞性肺疾病中细胞凋亡和炎症，且在慢性阻塞性肺疾病中二者表达呈负相关关系。本研究发现，PE病人胎盘组织中lncRNA SNHG5与miR-132-3p表达呈负相关关系，且二者联合诊断PE的曲线下面积为0.921，敏感度和特异度分别为89.7%、81.7%，进一步提示lncRNA SNHG5、miR-132可能共同参与PE的发生、发展过程，可同时作为诊断PE发生的潜在分子标志物。
综上所述，PE病人胎盘组织中lncRNA SNHG5低表达，miR-132-3p高表达，二者水平呈负相关关系，且与病人收缩压、舒张压及24 h尿蛋白水平具有相关关系，推测lncRNA SNHG5、miR-132-3p可能与PE的发生、发展密切相关。通过对PE病人lncRNA SNHG5、miR-132-3p表达水平检测，有助于PE早期诊断及为治疗提供更优质方案。但lncRNA SNHG5、miR-132-3p在PE发生机制中的具体作用以及二者之间的调控机制如何，还有待更深入的探讨。
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表 1 实时荧光定量PCR引物序列
基因 正向引物5′-3′ 反向引物5′-3′ lncRNA SNHG5 TAG AGA TGC AAA GAT ACA CGA AA CAC ACT CAG AAC GCT GTT CAC GAPDH GGT GAA GGT CGG AGT CAA CG CAA AGT TGT CAT GGA TGH ACC miR-132-3p ACGC ACC ACT AAC AGT CTA CAG C TAT GCT TGT TCT CGT CTC TGT GTC U6 CTC GCT TCG GCA GCA CA AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT 
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表 2 3组一般资料比较(x±s)
分组 n 年龄/岁 孕周/周 BMI/(kg/m2) 24 h尿蛋白/g 收缩压/mmHg 舒张压/mmHg 对照组 60 34.68±4.96 36.32±4.21 27.49±5.76 0.21±0.05 119.92±34.68 78.94±10.21 轻度组 54 34.97±5.06 37.13±3.74 27.28±5.54 1.19±0.53* 148.36±33.19* 96.45±17.32* 重度组 58 35.29±6.24 36.75±3.92 27.67±5.47 1.35±0.69* 164.52±37.64*# 107.64±26.65*# F — 0.18 0.59 0.07 89.87 24.23 33.41 P — >0.05 >0.05 >0.05 < 0.01 < 0.01 < 0.01 MS组内 — 29.751 15.757 31.300 0.250 1 243.188 370.013 q检验: 与对照组比较*P < 0.05；与轻度组比较#P < 0.05
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表 3 3组孕妇胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p相对表达水平比较(x±s)
分组 n lncRNA SNHG5 miR-132-3p 对照组 60 1.04±0.37 1.10±0.39 轻度组 54 0.76±0.24* 1.61±0.47* 重度组 58 0.61±0.32*# 1.74±0.51* F — 28.03 32.11 P — < 0.01 < 0.01 MS组内 — 0.100 0.210 q检验: 与对照组比较*P < 0.05；与轻度组比较#P < 0.05
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表 4 胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p表达与PE病人临床指标的相关关系(r)
项目 年龄 孕周 BMI 24 h尿蛋白 收缩压 舒张压 lncRNA SNHG5 -0.043 -0.083 -0.023 -0.440** -0.584** -0.614** miR-132-3p 0.079 0.069 0.038 0.310* 0.642** 0.552** *P < 0.05, **P < 0.01
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[1] 赵花, 田玲, 沈禾, 等. 凝血功能指标及血小板参数与子痫前期的相关性研究[J]. 蚌埠医学院学报, 2020, 45(7): 883. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2020.07.011 [2] 王影. 妊娠期高血压及子痫前期对妊娠及新生儿结局的影响研究[J]. 世界最新医学信息文摘, 2019, 19(7): 118. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-WMIA201907078.htm [3] 李鹏云, 王艳, 闫欢, 等. 子痫前期中lncRNA对滋养细胞的作用及机制研究[J]. 现代妇产科进展, 2017, 26(1): 70. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XDFC201701021.htm [4] 周美芳. 早发型子痫前期血清胎盘生长因子与子宫动脉血流、分娩孕周及新生儿出生体重的关系[J]. 中国计划生育学杂志, 2019, 27(1): 107. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-JHSY201901034.htm [5] 刘沙沙, 左俊芳, 崔洪艳. 长链非编码RNA与子痫前期相关机制的研究进展[J]. 国际妇产科学杂志, 2018, 45(3): 250. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-GWVC201803002.htm [6] 彭迎春, 张媛, 杨志娟, 等. lncRNA-SNHG5在重度子痫前期胎盘组织中的表达及其对滋养细胞增殖能力影响的机制[J]. 广西医学, 2020, 42(18): 2389. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-GYYX202018016.htm [7] 刘文娟, 彭静, 柳杨. miRNA-27b在子痫前期胎盘中的表达及丹参对其表达的影响[J]. 蚌埠医学院学报, 2018, 43(5): 577. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2018.05.004 [8] AKGÖR U, AYAZ L, ÇAYAN F. Expression levels of maternal plasma microRNAs in preeclamptic pregnancies[J]. J Obstet Gynaecol, 2021, 41(6): 910.
[9] BULLETINS-OBSTETRICS A. Diagnosis and management of preeclampsia and eclampsia[J]. Obstet Gynecol, 2002, 99(1): 159.
[10] MAYRINK J, COSTA M, CECATTI J. Preeclampsia in 2018: revisiting concepts, physiopathology, and prediction[J]. Sci WORLD J, 2018, 2018(6268276): 9.
[11] PHIPPS E, PRASANNA D, BRIMA W, et al. Preeclampsia: updates in pathogenesis, definitions, and guidelines[J]. Clin J Am Soc Nephrol, 2016, 11(6): 1102.
[12] 李睿, 罗云波. lncRNA及其生物学功能[J]. 农业生物技术学报, 2016, 24(4): 600. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-NYSB201604015.htm [13] CHEN Q, JIANG S, LIU H, et al. Association of lncRNA SH3PXD2A-AS1 with preeclampsia and its function in invasion and migration of placental trophoblast cells[J]. Cell Death Dis, 2020, 11(7): 583.
[14] 杨志娟, 张媛, 彭迎春, 等. 长链非编码RNA SNHG5在重度子痫前期患者胎盘中的表达及其通过miR-155/CXCR4对滋养细胞侵袭的影响[J]. 山西医科大学学报, 2020, 51(8): 507. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-SXYX202008012.htm [15] 陈宋, 姜从桥. lncRNA TUG1调控miRNA-145促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭[J]. 蚌埠医学院学报, 2020, 45(11): 1467. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2020.11.004 [16] 罗春芳, 唐玉兰. miRNA对多发性硬化CD4~+T淋巴细胞分化调控机制的研究进展[J]. 中国神经免疫学和神经病学杂志, 2021, 28(2): 158. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZSMB202102013.htm [17] 胡铭阳, 明佳. lncRNA与miRNA相互调控机制的研究进展[J/CD]. 转化医学电子杂志, 2017, 4(2): 71. [18] SHEN Q, ZHENG J, WANG X, et al. LncRNA SNHG5 regulates cell apoptosis and inflammation by miR-132/PTEN axis in COPD[J]. Biomed Pharmacother, 2020, 126(1): 110016.
[19] 徐建光, 柳建芳, 冯琼, 等. lncRNA SNHG3在慢性阻塞性肺疾病患者外周血单个核细胞表达与临床意义[J]. 海南医学院学报, 2020, 26(2): 107. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-HNYY202021010.htm
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